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    Tunel檢測(cè)病理實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)

    Tunel檢測(cè)病理實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)

    型號(hào):   更新時(shí)間:2023-10-23

    簡(jiǎn)要描述:

    Tunel檢測(cè)病理實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù) Tunel檢測(cè)可以標(biāo)記組織細(xì)胞中發(fā)生凋亡的細(xì)胞,通過(guò)核復(fù)染計(jì)數(shù)細(xì)胞比例,可以計(jì)算一定組織細(xì)胞中發(fā)生凋亡的細(xì)胞比例,常用在各方向生物學(xué)研究中凋亡發(fā)生的檢測(cè)以及定性比較。

    品牌上海創(chuàng)凌供貨周期現(xiàn)貨
    應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)

    Tunel檢測(cè)病理實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原理

    晚期凋亡細(xì)胞中染色體DNA雙鏈或單鏈斷裂產(chǎn)生粘性3'-OH末端,在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)的催化下,將帶有熒光素分子的dUTP標(biāo)記到DNA的3'-末端,然后通過(guò)熒光顯微鏡觀察、或進(jìn)而用帶有HRP的一抗染色后DAB顯色,可以進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測(cè),該實(shí)驗(yàn)稱(chēng)為脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)。

    Tunel檢測(cè)可以標(biāo)記組織細(xì)胞中發(fā)生凋亡的細(xì)胞,通過(guò)核復(fù)染計(jì)數(shù)細(xì)胞比例,可以計(jì)算一定組織細(xì)胞中發(fā)生凋亡的細(xì)胞比例,常用在各方向生物學(xué)研究中凋亡發(fā)生的檢測(cè)以及定性比較。

    實(shí)驗(yàn)流程

    石蠟切片/冰凍切片/細(xì)胞爬片-脫蠟-通透-酶標(biāo)記反應(yīng)-HRP抗體,DAB顯色,可白光拍照-核復(fù)染-觀察拍照。

    實(shí)驗(yàn)方法

    對(duì)于貼壁細(xì)胞或細(xì)胞涂片

    a. PBS或HBSS洗滌一次。

    b. 如果細(xì)胞貼得不牢,可以干燥樣品使細(xì)胞貼得更牢。

    c. 用4%多聚甲醛或碧云天生產(chǎn)的免疫染色固定液(P0098)固定細(xì)胞30-60分鐘。

    d. 用PBS或HBSS洗滌一次。

    e. 加入含0.1% Triton X-100的PBS,冰浴孵育2分鐘。

    f. 轉(zhuǎn)步驟5。

    對(duì)于懸浮細(xì)胞或細(xì)胞懸液

    a. 收集細(xì)胞(不超過(guò)200萬(wàn)細(xì)胞),PBS或HBSS洗滌一次。

    b. 用4%多聚甲醛固定細(xì)胞30-60分鐘。為防止細(xì)胞聚集成團(tuán),宜在側(cè)擺搖床或水

    平搖床上緩慢搖動(dòng)的同時(shí)進(jìn)行固定。

    c. 用PBS或HBSS洗滌一次。

    d. 用含0.1% Triton X-100的PBS重懸細(xì)胞,冰浴孵育2分鐘。

    e. 轉(zhuǎn)步驟5。

    對(duì)于石蠟切片

    a. 二甲苯中脫蠟5-10分鐘。換用新鮮的二甲苯,再脫蠟5-10分鐘。無(wú)水乙醇5分鐘。90%乙醇2分鐘。70%乙醇2分鐘,蒸餾水2分鐘。

    b.滴加20μg/ml不含DNase的蛋白酶K,20-37作用15-30分鐘(不同組織的作用溫度和時(shí)間需自行摸索)。

    c. PBS或HBSS洗滌3次。注意:這一步必須把蛋白酶K洗滌干凈,否則會(huì)嚴(yán)重干擾后續(xù)的標(biāo)記反應(yīng)。

    d. 轉(zhuǎn)步驟5。

    對(duì)于冷凍切片

    a. 用4%多聚甲醛固定細(xì)胞30-60分鐘。

    b. PBS或HBSS洗滌2次,每次10分鐘。

    c. 加入含0.1% Triton X-100的PBS,冰浴孵育2分鐘。

    d. 轉(zhuǎn)步驟5。

    對(duì)于貼壁細(xì)胞、細(xì)胞涂片或組織切片

    a. 用PBS或HBSS洗滌2次。

    b. 在樣品上加50μl TUNEL檢測(cè)液,37避光孵育60分鐘。注意:孵育時(shí)需注意在周?chē)媒闼募埢蛩幟薜缺3譂駶?rùn),以盡量減少TUNEL檢測(cè)液的蒸發(fā)。

    c. PBS或HBSS洗滌3次。

    d. 用抗熒光淬滅封片液封片后熒光顯微鏡下觀察。可以使用的激發(fā)波長(zhǎng)范圍為450-500nm,發(fā)射波長(zhǎng)范圍為515-565nm(綠色熒光)。

    對(duì)于懸浮細(xì)胞或細(xì)胞懸液

    a. 用PBS或HBSS洗滌2次。

    b. 加入50μl TUNEL檢測(cè)液,37避光孵育60分鐘。

    c. PBS或HBSS洗滌2次。

    d. 用250-500μl PBS或HBSS懸浮。

    e. 此時(shí)可以用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)或涂片后在熒光顯微鏡下觀察。可以使用的激發(fā)波長(zhǎng)范圍為450-500nm,發(fā)射波長(zhǎng)范

    圍為515-565nm(綠色熒光)。

    Tunel檢測(cè)病理實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)樣本保存運(yùn)輸

    實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

    標(biāo)本要求

    標(biāo)本保存運(yùn)輸條件

    可能存在風(fēng)險(xiǎn)

    建議

    Tunel檢測(cè)

    按制作石蠟切片、冰凍切片、細(xì)胞爬片要求送樣

    石蠟切片常溫、冰凍切片-20℃、固定后細(xì)胞爬片

    染色結(jié)果同造模效果密切相關(guān),正常組織可能陽(yáng)性率很低

    以實(shí)際結(jié)果為準(zhǔn)


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