SILAC-細(xì)胞差異蛋白質(zhì)組分析服務(wù)

一、SILAC-細(xì)胞差異蛋白質(zhì)組分析服務(wù)簡(jiǎn)介

SILAC（Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture）是基于哺乳動(dòng)物細(xì)胞生長對(duì)“必需氨基酸”的依賴原理，將穩(wěn)定同位素（13C、15N）標(biāo)記的Lys（K）和Arg（R）加入細(xì)胞培養(yǎng)基中對(duì)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。在細(xì)胞的增殖過程中，穩(wěn)定同位素標(biāo)記的K和R自然“摻入”到蛋白質(zhì)中，從而在細(xì)胞中所有的蛋白質(zhì)上引入了質(zhì)量標(biāo)簽（Mass Tag，3-10Da）。借助后續(xù)MS的高分辨率，在MS層面上，實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)水平進(jìn)行高精度定量的技術(shù)。

SILAC技術(shù)基本的應(yīng)用是做細(xì)胞/細(xì)胞亞組分（細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、線粒體、外泌體等）的各種蛋白質(zhì)表達(dá)差異譜分析。此外，（1）使用SILAC技術(shù)標(biāo)記小鼠、酵母、大腸桿菌、果蠅、線蟲等模式生物，從而可以借助MS直接定量比較動(dòng)物個(gè)體的蛋白質(zhì)組差異（SILAM）；（2）利用SILAC技術(shù)，借助細(xì)胞株，通用可以分析人體的不同組織的蛋白質(zhì)表達(dá)譜差異（super-SILAC）；（3）SILAC結(jié)合IP-MS（免疫沉淀-質(zhì)譜）可定量分析蛋白質(zhì)互作/翻譯后修飾的定量分析（SILAC+IP-MS）。

SILAC技術(shù)的優(yōu)勢(shì)體現(xiàn)在（1）直接通過細(xì)胞代謝，實(shí)現(xiàn)對(duì)整個(gè)細(xì)胞蛋白質(zhì)組的標(biāo)記，從實(shí)驗(yàn)的源頭引入質(zhì)量標(biāo)簽（Mass tag），實(shí)驗(yàn)的系統(tǒng)誤差顯著降低；（2）實(shí)驗(yàn)步驟簡(jiǎn)單，只要將SILAC標(biāo)記的和非標(biāo)記的蛋白質(zhì)1:1混合，就能進(jìn)行后續(xù)MS分析；（3）定量準(zhǔn)確度更高，定量信息豐富。

二、SILAC-細(xì)胞差異蛋白質(zhì)組分析服務(wù)服務(wù)方案

（一）整體服務(wù)：

只需客戶提供細(xì)胞即可，我方負(fù)責(zé)完成：

SILAC培養(yǎng)基制備。

細(xì)胞SILAC標(biāo)記及標(biāo)記效率MS檢測(cè)；

SILAC標(biāo)記細(xì)胞與非標(biāo)記細(xì)胞擴(kuò)增；

蛋白質(zhì)提取、分離（SDS-PAGE）及染色；

切割條帶，分別進(jìn)行LC-MS測(cè)試；

MS數(shù)據(jù)分析，完成蛋白質(zhì)的鑒定及定量分析，篩選差異表達(dá)蛋白；

差異表達(dá)蛋白常規(guī)生物信息學(xué)分析；

我方同樣有技術(shù)實(shí)力進(jìn)行具體蛋白質(zhì)（經(jīng)用SILAC實(shí)驗(yàn)篩選、驗(yàn)證后的蛋白）的功能實(shí)驗(yàn)。如有需求，方案另議。

（二）合作共贏方案：

原則是通過協(xié)商簽訂合同，雙方各完成一部分實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。

客戶方需從我方購買相應(yīng)的SILAC培養(yǎng)基及耗材。我方提供細(xì)胞SILAC標(biāo)記的實(shí)驗(yàn)方案，協(xié)助客戶完成細(xì)胞的SILAC標(biāo)記過程。

標(biāo)記完成后，需用LC-MS鑒定細(xì)胞標(biāo)記效率。該步驟需交由我方完成鑒定。

正式實(shí)驗(yàn)的蛋白質(zhì)樣品，需交由我方完成MS鑒定和定量分析。

三、其他特色：

SILAC培養(yǎng)基。我方能生產(chǎn)多種類型的SILAC培養(yǎng)基（K6R6、K4R6、K6R8、K8R10等），7-10個(gè)工作日發(fā)貨，免去客戶從國外進(jìn)口SILAC培養(yǎng)基及其標(biāo)記氨基酸的漫長貨期。

SILAC培養(yǎng)基，500ml起訂。

我方同時(shí)銷售SILAC相關(guān)的試劑/耗材（dialyzed FBS，filter等），歡迎咨詢。

四、客戶發(fā)表的代表性論文：

Analytical chemistry 2017, 89(19):10248-10255. 

Analytical chemistry 2017, 89(21):11468-11475.

Journal of proteome research 2013, 12(5):2055-2066.

Amino acids 2014, 46(4):841-852.